需10mm硫酸铵加入50ml溶液,取1m硫酸铵多少体积

小公举คิดถึง 2024-05-15 15:58:24
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硫酸铵可能会损坏某些蛋白。加入硫酸铵晶体时应小心:局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀。
对于常规可再生的纯化过程,可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析。
通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效。

沉淀所需溶液:
饱和硫酸铵溶液(在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵,搅拌溶解)。
1m tr**-hcl,ph 8.0
用于第一步纯化的缓冲液。

方法:
1,过滤(0.45μm膜)或离心样品(4°c 10000g)。
2,每10倍体积的样品中加入一倍的1m tr**-hcl,ph 8.0以维持ph值。
3,温和搅拌。逐滴加入硫酸铵溶液,最高至50%饱和度。搅拌1小时。
4,10000g离心20min。
5,去除上清,用等体积相同浓度的硫酸铵溶液(如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液)洗涤重悬沉淀两次。再次离心。
6,使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀。
7,硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去。 20210311
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