我现在想要将引物加水稀释，od：2.0，nmol/od=5.17,mw=5784.83,请问我该如何加水稀释？

~swenty ~ 2024-05-08 16:03:59

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以下使用方法希望对你有用：

1. oligodna是以od₂₆₀为单位来计量的，是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中，260nm波长下吸光度为1a_260nm 的oligo溶液定义为1od₂₆₀单位。根据此定义，1od₂₆₀单位相当于33µg的oligodna，您可根据此数据和您的oligodna分子量计算得到摩尔数，以此计算不同摩尔浓度的溶液。2. 引物合成公司提供的序列报告中分子量计算公式如下： mw=(a碱基数×312)+(c碱基数×288)+(g碱基数×328)+(t碱基数×303)-61。例如：tgggcggcggtggtgttacgt mw=（1×312）+（3×288）+（11×328）+（6×303）-61=65413. oligodna的分子量还可以用以下近似方法计算： oligodna中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5，则一条oligodna的分子量=碱基数×324.5。例如，您得到一管标为1od_260nm的20 个碱基oligodna分子量=20×324.5=6490质量数=1×33=33µg摩尔数=33/6490=0.0051µmol4. 引物在出厂时都标有1od 相当于多少µmol 的计算结果，进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算：稀释成100pmol/µl时：1od引物的加水量（µl）=1od相当于µmol 数×10000例如：您拿到的引物dna合成报告单上标有1od≈0.0035µmol，包装量是1od/管，如果您希望将引物浓度定为100pmol/µl（µmol/l），那么只需用35µl无核酸酶的双蒸水将1od的引物干粉溶解即可。5. 由于oligodna呈很轻的干膜状附在管壁上，打开时极易散失，所以打开管子前请先离心，然后再慢慢打开管盖，溶解时请加足量水后盖上管盖，充分上下振荡5-10分钟。6. 需对oligodna作电泳分析，必须采用含7m尿素的聚**凝胶电泳和1倍tbe buffer，琼脂糖电泳不适于oligodna电泳，另外为防止加样时的扩散和二级结构影响，样品上样前必须加饱和尿素处理再上样。7. oligodna的5’端和3’端均为羟基，若需磷酸基团的则要另外再处理或直接在合成时于5’和3’端标上磷酸。8. 由于溴化乙锭对单链寡聚dna的染色效果与dna的结构和长度关系密切，相等od值的不同oligodna样品染色后深浅可大不相同，若电泳后eb染色不出现条带或出现的条带很浅，您可将电泳凝胶于荧光板上再在紫外灯下观察，往往会看到明亮的绿色荧光背景下清晰的黑色条带；若无此条件，也可用紫外分光光计度对od值进行检测。9. 干粉状态的oligodna可长期贮存。溶解后建议分装成若干管，-20℃保存，用一管取一管。溶解后的引物4℃保存不超一周为宜。 20210311

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