基因敲除小鼠模型设计中,2a和ires的选择有何区别

答应我吃火锅好吗 2024-05-24 17:35:58
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基因敲除小鼠模型设计中,2a和ires的选择有何区别 ires的优缺点: 优点:ires被放置于两个 orf之间的时候,可以同时表达这两 orf。由于两个orf分别有自己的起始密码子和终止密码子, 所以会 翻译两个完全独立的、没有经过修饰的蛋白。 缺点:ires的存在有时候会影响 mrna的结构,同时由于 ires 和mrna的5‘cap对核糖体/或翻译起始复合物的结合力不同, ires后面的orf翻译蛋白的水平有可能与ires前面的orf蛋白 水平不一致。有的时候前面的orf表达很好,但后面的orf表达 水平不高;有的时候后面的orf ires会影响前面orf的表达,甚至前面的orf根本不表达。 2a的优缺点: 优点:两个基因(orf)通过2a多肽连接成为一个orf, mrna翻译 成一个融合蛋白,但这个融合蛋白会被识别 2a的蛋白酶切成两 个蛋白。这两个蛋白的摩尔比理论上是1:1。 缺点:2a是一个大约23个氨基酸的多肽。蛋白酶切割会发生在 2a多肽c端的甘氨酸(g)和脯氨酸(p)之间。所以,前一个蛋白 的尾巴上会留下一个20多个氨基酸的多肽(融合蛋白)。后面一 个蛋白的n端会留下一个多余的脯氨酸。尤其是第一个蛋白,如 果是一个小分子(比如分泌型的细胞因子),可能其功能会受到 这20多个多肽的影响。 不管用哪个,建议先做细胞实验,以检查 ires对基因表达 的影响(尤其是ires)或2a对目的蛋白的影响。 20210311
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