如何进行近交系动物遗传质量控制

冀DXR笑然 2024-05-25 12:02:59
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第章 总 则  第条 根据家科委第2号令《实验物管理条例》规定加强医实验物科管理保证实验物质量满足科研究、教、医疗、产、经济建设发展需要特制定本细则  第二条 本细则所称实验物指源清楚(遗传背景及微物控制)用于科研究、教、医疗、产、检定及其科实验物  第三条 医实验物管理应符合家关标准化律、规《医实验物管理实施细则》要求并实行实验物合格证制度  第四条 卫系统医实验物业务工作由卫部医实验物管理委员负责指导卫部聘请关专家组实验物专家咨询委员作卫部咨询机构协助卫部宏观面医实验物科技术发展、预测、评估、技术政策、组织协调等提供咨询进行科研课题论证科研审查等  第二章 实验物管理机构  第五条 卫部医实验物管理委员由卫部聘请关员及专家组负责全医实验物管理工作制定关条例执行细则协调监督各省、自治区、直辖市医实验物工作  第六条 各省、自治区、直辖市卫厅(局)应领导参加主管医实验物工作聘请关专家管理员立本省、(区)医实验物管理委员卫厅(局)领导负责本省、(区)医实验物管理工作按统标准负责核发实验物合格证专业受卫部医实验物管理委员指导监督同接受科委宏观统领导  遵照家科委意见各区医实验物管理委员根据情况加入各区科委组织跨行业实验物管理委员京、沪两医实验物管理委员卫部试点单位我先立两实验物管理机构应继续做工作  第七条 各单位要立医实验物管理委员或组其员由科研员、实验物管理及其关行政管理员组其领导工作由院(所)级主管科研工作领导负责该管委或组负责本单位关实验物全面管理工作  第三章 医实验物质量检定标准  第八条 医实验物遗传检测标准  医实验物必须根据遗传质量控制要求制定科管理制度保证同物遗传质量标准(杂交系、远交系、封闭群近交系)  近交系、鼠遗传质量标准  、管理制度  1.引种源清楚应带谱系及物特性资料(近交代数、交配式、遗传组、物特性)应符合际公认遗传概貌标准  2.按际规定近交系物繁殖系统进行种群维持产  (1)基础群血缘扩群  应同胞兄妹交配进行基础群维持定按近交系保种进行并应具谱系及体卡片记录  (2)产群  随机交配(或红绿灯)进行产连续繁殖3—5代其产群种鼠应与基础群血缘关系保持相平行  二、遗传质量检查  1.选择  (1)同系异体皮肤移植  论鼠鼠异体皮肤移植直鉴定近交系经典由于该既经济权威列首选  (2)化电泳  近利用同功酶蛋白质态性近交系物进行遗传监测1种规由于其快速、准确、灵敏检亚系物比起皮肤移植其独特处作近交系、鼠遗传质量检查重要  2.位点选择  近交系物遗传品质变异主要3面素  (1)遗传污染;  (2)遗传飘变;  (3)遗传突变;  3面遗传污染另两面定间内发改变频率低位点选择根据现用10种近交系鼠选择位于7条染色体8差异性位点作检查第线位点任何种品系发遗传污染8位点某些位点现杂合或者变异考虑位点选择尽量布染色体再选择位于5条染色体五比较容易操作耗资较少位点作第二线位点检查鼠选择7位点进行检查作第线位点原则第线位点检查发现问题再进行第二线位点检查  第线位点:  hbb,car—2gpd—1es—3trf,gpi,idh—1  第二线位点:  pgm—1es—10sep—1got—2  3.物选择  近交系鼠、鼠每品系至少进行四物异体皮肤移植皮肤移植功者需核群选送四物(2♂2♀)进行化位点检查皮肤移植失败者则考虑进行化位点检查(见附表1、2)  第九条 医实验物微物控制标准:  级:普通物即要求排除畜共患病病原体;  二级:清洁物要求排除畜共患病及物主要传染病病原体;  **:特殊病原体(spf)物要求达二级标准外应排除些病原体  四级:菌物排除非植入切命体  、实验物病原菌检测等级标准(见附表5)  二、实验物病毒检测等级标准(见附表3、4)  三、实验物寄虫检测等级标准(见附表6)  实验物病理检查标准:  级:普通物  外观:毛色光滑清洁贴身;泼行异;脸肿;背穹起;四肢、尾皮肤缺损;喘鼻泌物;**门清洁  病理解剖:肝、脾、淋巴结肿;肺、肝、脾、肾肉眼见应病灶  二级:清洁物  具级普通物指标显微镜检查没二级微物病原病变  **:特殊病原体物  具级普通物指标二**物微物病原病变  四级:菌物  除具级指标外含二**物微物病原病变;脾、淋巴结等脏器具菌物组织结构  关遗传突变免疫缺损等物根据各品系特征规定检查  第四章 医实验物条件设施检定标准  第十条 实验物及物实验设施标准  确保实验物遗传特性微物控制标准相稳定实验结科水平目  第十条 实验物设施应结构:  、前区包括:隔离检疫室、库房、办公室、饲料库、维修室走廊  二、控制区(饲育区)包括:育种室、种群扩室、繁殖室、待发室、清洁物品贮藏室、饲料制作室清洁走廊  三、勤区包括:洗刷消毒间、废弃物品存放、处理间、污物走廊等  第十二条 实验物及物实验设施要求  、普通物(通物)  1.外环境条件  (1)院容整齐、清洁、定期消毒;  (2)定绿化面积;  (3)设专用垃圾、物尸体存放处尸体解剖间物尸体须24内焚烧或按关规定处理;  (4)物室附近饲养非实验用家禽、家畜  2.物室建筑条件:  (1)要达定建筑标准;  (2)型物饲养室进口直接外应缓冲间;  (3)防昆虫纱门纱窗;  (4)花板光洁、能消毒;  (5)面平坦面及墙壁能洗刷;  (6)要自水封闭式水道(防止野鼠窜入);  (7)要换气装置及防野鼠设备  3.饲养室内环境条件:  (1)室温温差应18度至29度间(、鼠、豚鼠鼠等)  (2)相温度60%±20%;  (3)空气氨含量应低于20ppm:  (4)室内噪声60贝;  (5)饲养室内要整洁杂物、污物、昆虫等  4.笼、饲具条件  (1)应使用易于清洁、消毒及操作笼具;  (2)饲具及饮水用具需能进行消毒并需使用锈材料制作  5.管理条件  (1)制度:要物室规章制度操作规程岗位责任制工作定额;  (2)工作记录:笼卡饲养室记物帐目;  (3)环境记录:温度、湿度等要实填写;  (4)员卫:要穿清洁工作服戴工作帽、口罩、手套穿工作鞋等;  (5)铺垫物要消毒;  (6)要物室工作员专用洗澡设备  6.卫防疫设施  (1)要洗刷、消毒设备制度;  (2)隔离、检疫设施及防疫措施  二、清洁物除达普通物要求外必须达列各项要求  1.建筑条件  (1)尽能做清洁与污染物;  (2)门、窗要达密封要求;  (3)缓冲间;  (4)淋浴室或更衣室  2.饲育室内环境条件  (1)相湿度60%±5%;  (2)室内噪声55贝;  (3)换气装置:强力通风效滤空调装置;  (4)换气数:全新风8/室内压;  (5)室内昆虫;  (6)室内照明:明暗各12左右或符合要求自采光;  (7)饲养室内墙壁较低部位及面每周消毒两;  (8)排污物(包括铺垫物等)设施应半封闭式能进行消毒防交叉污染  3.管理条件  (1)工作服、帽、饲料、笼、饲具等要消毒;  (2)工作员进入饲育区前要淋浴更衣  三、特殊病原体物与菌物设备要求(见附表9)  四、实验物实验室  实验物实验室低标准应达相应实验物级别实验物饲养室标准具体要求参照述条例  第十三条 实验物饲料质控标准  、用于实验物饲料应根据各种物同理特性发育同阶段需要制定其营养份所含害物质安全限量(见附表7、8)  二、科设计各种实验物饲料配  1.各种实验物饲料配应根据实验物同需要能量科设计  2.确定饲料配任意更改力求稳定  3.饲料添加抗菌剂、抗虫剂、防腐防霉及激素等其药物  4.用非标准饲料饲养实验物  三、原料要求及保管  1.精选新鲜、杂质、毒、污染、霉变、虫蛀、鼠咬各种原料  2.应设专门饲料库房  饲料库房应保持干燥、通风、虫、野鼠经保持清洁卫各种饲料或原料应类堆放整洁  3.维素类原料应存放避光、低温干燥处  4.加工品与原料应保管  5.饲料库房内严禁存放杂品及毒**品等  6.饲料库房必须建立严格领发、保管制度及完善管理手续  四、加工制作  选择优质原料按饲料配比准确称重充混匀植物油、维素及机盐类先与少量粉料混匀再与量粉料充混匀加工制料块应适宜硬度及适口性  料块品装入毒清洁饲料桶或清洁纸袋内封口贴或挂注明饲料种类、制作期及制作标签品料块存放超两月  第十四条 实验物检疫要求  预防实验物群体发传染病避免新引进物原物及关员造危害提高实验物健康水**规定:  、新引进物必须隔离检疫确定传染病移入饲养区  二、畜共患传染病疫区引进物  三、物发传染病死亡应及进行处理(病理尸检实验室检查)作诊断提处理意见**负责或主管部门(各级实验物管理委员)  四、传染病应非传染病物用于物试验发传染病原则全部销毁;房屋、用具、笼架具、垫料、衣服、鞋帽等必须进行彻底消毒;物室消毒封闭定间才能放使用  五、实验物发烈性传染病流行应立即报告医实验物管理委员同采取严格隔离措施防传染病蔓延;拖延或隐瞒报者所单位要承担责任并吊销其合格证  六、野物检疫应由使用单位进行检疫确认畜共患病及物传染病使用  第五章 实验物保种、引种、供应与应用  第十五条 本细则所称保种、引种指扩产群提供种基础种群(种群源清楚包括:遗传背景微物控制情况及关资料)  第十六条 实验物保种  、保种单位必须具符合实验物级别要求设施条件由高、级实验物科技员直接管理定期进行质量检测  二、保种单位责任按计划向产单位提供种所提供种物要保种单位负责签发标明品系、遗传背景、微物控制情况(物等级等资料)合格证副本  三、保种单位权根据引种单位情况提引种指导意见引种单位义务反馈关种产使用情况  第十七条 实验物引种  、引种单位需获实验物产、供应合格证引种  二、各引种单位要定期向管委提供所引种产繁育等情况关资料  三、般情况近交系产群每应进行1遗传质量检测  第十八条 实验物供应  、实验物产、供应单位所提供实验物必须保证质量要单位负责签发标明遗传背景、微物控制情况等关资料及实验物合格证副本(注明:供应数量、期及使用实验物课题)作使用实验物合格根据  二、实验物产、供应单位科研课题供应尚未取合格证物  三、实验物产、供应单位权尚未取物实验条件合格证单位停止供应实验物  四、实验物产、供应单位实验物使用单位都应信守双签定供、需计划合同(合同应按家合同签定)  第十九条 实验物应用  、应用实验物应根据同目选用相应合格实验物并具相应合格物实验条件申报课题评审科研要应用合格实验物作必备条件;应用合格实验物所做鉴定效所产制品投入使用  二、实验物运输器具要安全靠符合微物控制等级要求同品系物混装运输程应保证实验物健康安全  第六章 实验物工作员  第二十条 实验物产、供应单位必须适比例高级、级初级科技员各类员都要遵守实验物饲育管理各项制度  第二十条 实验物保种、产供应单位所提供种实验物要认实验物科技员签章负责  第二十二条 事实验物工作各级员都要实行资格认制度由省、市级医实验物管理委员负责定期考核并定期进行培训提高业务水平考核绩作评定晋升技术职称依据  第二十三条 事实验物工作员应享受必要劳保护福利待遇保证其健康  第二十四条 实验物工作员应定期进行身体健康检查发现患传染病者特别畜共患病者应及调换工作  第七章 奖励与惩罚  第二十五条 各级医实验物管理委员期事实验物饲育管理、科研工作忠于职守辛勤劳取显著绩单位应给予表彰、奖励或授予荣誉称号  第二十六条 违反细则供应应用合格实验物产供应应用单位由医实验物管理委员别同情况给予警告限期改进责令关闭等处理;造损失追究其行政责任民事责任;情节严重构犯罪应追究其刑事责任  第八章 附 则  第二十七条 本细则由卫部医实验物管理委员负责解释  第二十八条 本细则自19896月1起执行  表1 用10近交系鼠品系差异性位点  ------------------------------------------------------------------------------  locus(chromosome number)  strain hbb(7) car-2(3) gpd-1(4) es-1(8) es-3(11) trf(9) gpi-1(7) idh-1(1)  ----------------------------------------------------------------------  615 s a b b c b a a  ta1 s b b a a b a a  ta2 d a b b c b b a  balb/c d b b b a b a a  c57bl/6j s a a a a b b a  cba/n d a b b c a b b  cba/jola d b b b c a b b  c3h/he d b b b c b b b  dba/2n d b b b c b a b  kk s a a b c b b a  表2 用4近交系鼠品系差异性位点  ------------------------------------------------------------  locus  es-3 es-4 es-6 es-8 es-9 es-10  strain  ------------------------------------------------------------  f344/n a b a b a a  lou/cn a b b b a a  shr/ola b a a b a a  wky/ola d b a a c b  表3 齿类实验物病毒检测等级标准  -----------------------------------------------------  | | 物种类  物等级 | 病 毒 |-----------  | |鼠|鼠|豚鼠|鼠  -----------------------------------------------------  四|三|二| | | | | |  级|级|级|普|淋巴细胞性脉络丛脑炎病毒lymphocytic choriomegit** virus(lcm)| 0 | 0 | | 0  : |: |: |级通物|流行性血热病毒epizootic hemorrhagic fever virus(ehfv) | 0 | 0 | |  悉||清|: |鼠脱脚病病毒(鼠痘病毒)eotromelia virus(poxvirus of mice) | 0 | | |  |特|洁| | | | | |  |殊||---|------------------------------|--|--|--|---  物|病|物 |鼠肝炎病毒mouse hepatit** virus(mhv) | 0 | | |  (|原|-----|------------------------------|--|--|--|---  |体 |猴病毒simian virus5(sv5) | | | 0 | 0  菌| |仙台病毒sendai virus | 0 | 0 | 0 | 0  |物 |鼠肺炎病毒pneumonia virus of mice(pvm) | 0 | 0 | 0 | 0  物| |呼肠弧病毒3型reovirus type 3(reo-3) | 0 | 0 | 0 | 0  | |鼠脑脊髓炎病毒mouse encephalomyelit** virus | 0 | 0 | 0 | 0  已| |鼠腺病毒mouse adenovirus(mad) | 0 | 0 | |  知| |k病毒kvirus (kv) | 0 | | |  菌| |鼠微病毒minute virus of mice(mvm) | 0 | | |  | |瘤病毒polyoma virus | 0 | | |  物| |toolan's病毒(h-1)toolan's virus(h-1) | | 0 | |  )| |鼠潜病毒kilham's rat virus(krv) | | 0 | |  | |鼠冠状病毒rat corona virus(rcv) | | 0 | |  | |鼠涎泪腺炎病毒sialodacryoadenit** virus(sd**) | | 0 | |  | |新鼠流行性腹泻病毒epizootic diarrhea of infant mice(edim| 0 | | |  | |乳酸脱氢酶病毒lactic dehydrogenase virus(ldh) | 0 | | |  | |鼠巨细胞病毒mouse cytomegalovirus(mcmv) | 0 | | |  |-------|------------------------------|--|--|--|---  |能检病毒 | | | |  -----------------------------------------------------  注:0要求没  表4 实验兔、猫、狗猴病毒检测等级标准  -------------------------------------------------  | | 物种类  物等级 | 病 毒 |-----------  | | 兔| 猫| 狗|猴  --------|----------------------------|--|--|--|--  四|三|二| | | | | |  级|级|级|通|狂犬病病毒rabies virus | | | 0 |  :|:|:|级|b病毒b virus | | | |0  悉||清|普物|兔细病毒(兔血症毒)rabbit parvovirus | 0 | | |  |特|洁| | | | | |  |殊||--|----------------------------|--|--|--|--  物|病|物 |猫白细胞减少症病毒(细病毒)feline panleukopenia virus| | 0 | |  |原| |狗细病毒canine parvovirus | | | 0 |  |体| |猴逆转d型病毒simian immunodeficiency d | | | |0  || |猴**病病毒simian immunodeficiency virus | | | |0  |物|----|----------------------------|--|--|--|--  | |猴泡沫病毒simian spum**irus | | | |0  | |猴病毒40simian virus 40(sv 40) | | | |0  | |狗病毒性肝炎病毒(狗腺病毒)canine viral hepatit** virus| | | |  | |兔痘病毒rabbit poxvirus | 0 | | 0 |  | |轮状病毒rot**irus | 0 | 0 | |0  | |仙台病毒sendai virus | 0 | | 0 |  | |猴巨细胞病毒simian cytomegatovirus | | | |0  | |猫嵌杯病毒feline calicivirus | | 0 | |  | |猫病毒性气管炎病毒(痘病毒)feline rhinotracheit** virus| | 0 | |  | |狗疱疹病毒canine herpesvirus | | | |  | |狗瘟热病毒(付流病毒)canine d**temper virus | | | 0 |  | |猴痘病毒simian poxvirus | | | 0 |0  | |猴腺病毒simian adenovirus | | | |0  |------|----------------------------|--|--|--|--  |能检病毒 | | | |  -------------------------------------------------  注:0要求没  表5 实验物病原菌检测等级标准  ---------------------------------------------------------  | | 物 种 类 |检验  物等级 | 病 原 菌 |--------------------|------  | | | | | | | | | |  | |鼠|鼠|豚鼠|鼠| 兔 | 狗 | 猴 |离|免疫  --------|--------------------|--|--|--|--|--|--|--|--|---  四|三|二| |沙门氏菌salmonella spp | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | 0 | √ |  级|级|级|级 |单核细胞增性李氏杆菌l**teria mono- | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  :|:|:|: |cytogenes | | | | | | | | |  悉||清|普 |假结核耶氏菌yersinia pesudotuberculos** | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |√  |特|洁|通 |布鲁氏菌brucella | | | | | | 0 | | √ |  |殊|| |志贺氏痢疾菌shigella | | | | | | | 0 | √ |√  物|病|物|物 |结核枝杆菌mycobacterium tuberculos** | | | | | | | 0 | √ |√  (|原|(| |皮肤真菌 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |  已|体||--|--------------------|--|--|--|--|--|--|--|--|--  知||物 |血败血性巴氏杆菌pastcurella mnlto- | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  菌|物|种 |cida | | | | | | | | |  |(| |支气管败血性包特氏菌berdetella bron- | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  物||应 |ch**eptica | | | | | | | | |  |物| |念珠状链杆菌streptobacillus moniliform**| 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  |种|源 |肠结肠炎耶氏菌yersinia cnterocoliitica| 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  菌||于 |肺支原体mycoplasma pulmon** | 0 | 0 | | | | | | √ |√  |应|剖 |溶神经支原体mycoplasma neurolyticum | 0 | | | | | | | √ |  物||腹 |关节炎支原体mycoplasma arthrilid** | | 0 | | | | | | √ |  )|源|产 |鼠棒状杆菌corynebacterium mur** | 0 | | | | | | | √ |√  |于|) |泰泽氏菌bacillus piliform** | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | |√  |剖|----|--------------------|--|--|--|--|--|--|--|--|--  |腹 |嗜肺巴氏杆菌pasteurella pneumotropica | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  |产 |肺炎克雷伯氏菌klebsiella pneumoniac | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  |) |金黄色葡萄球菌staphylococcus aureus | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  | |肺炎链球菌streptococcus pneumoniac | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  | |化脓性链球菌streptococus pyogenes | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  | |绿脓杆菌pscudomonas aeruginosa | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  | |特定病原菌 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | | | √ |  |------|--------------------|--|--|--|--|--|--|--|--|--  | | 注: √检验式 0要求没  表6 实验物寄虫监测等级标准  -------------------------------------------------  | | 物 种 类  物等级 | 寄 虫 |------------------  | |鼠|鼠|豚鼠|兔|猫|狗|猴  ---------|--------------------|--|--|--|-|-|-|---  四|三|二|级普|体外寄虫(节肢物) | 0 | 0 | 0 |0 20210311
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