3h-tdr是什么东西?掺入是什么意思?

陈路 2024-05-26 06:54:36
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一、词语解释1. 3h-tdr3h-tdr是一个专有名词的缩略语。“3h-tdr”是医学名词:氚-胸腺嘧啶核苷。氚-胸腺嘧啶核苷” 2. 掺入是试验用语,即将某一试剂或物质加入到培养液或 培养体系中的实验过程。 3. 3h-tdr掺入试验 基本原理 淋巴细胞受特异性抗原或有丝**原刺激后,在转化为淋巴母细胞的过程中,dna的合成明显增加。且其转化程度与dna的合成呈正相关,此时若将合成dna的前体物质胸腺嘧啶核苷用放射性同位素(3 h -tdr)标记,加入到培养体系中,即被转化的淋巴细胞摄取而掺入dna分子内。培养终止后,测定淋巴细胞内掺入的3 h -tdr的放射量,就能判断淋巴细胞的转化程度。此方法较客观、精确。 试剂及材料 1. 丝裂原:pha、con a、pwm或其他丝裂原。 2. 3 h -tdr(100μci/ml) 3. 5%**、** 4. 闪烁液:ppo 4g,popop 0.4g溶于1000ml**中。 5. 玻璃纤维滤膜及负压抽滤装置及β-计数仪; 操作方法 1. 刺激增殖反应: ①常规分离pbmc,用含20%ncs的rpmi-1640完全培养液调整细胞浓度至2.0×106 /ml; ②于96孔细胞培养板各孔中加入含20%ncs的rpmi-1640完全培养液100μl,然后于各孔加入上述细胞悬液100μl,于试验孔中加入丝裂原10μl(终浓度视其质量、活性而定,需预先摸索),对照孔加入生理盐水10μl; ③加盖,置37℃,5%co2 温箱培养3d; 2. 23 h-tdr掺入及检测: ①每孔加入20μl 3 h-tdr(相当于2μci,特异性比活性为5ci/mmol),继续培养4h; ②用细胞收集器将细胞吸附在玻璃纤维滤纸片上,用生理盐水充分洗涤,洗除游离的3 h-tdr;滴加5%**1~2ml固定细胞,滴加**脱水、脱色; ③将滤纸片烘干后,用镊子按其顺序分别依次放入盛有4ml闪烁液的塑料管内; ④β-闪烁仪自动测定样品1min,将份测定值中读数过高或过低者除去,取其平均值; 结果分析 刺激指数(stimulating index,si)的计算:丝裂原刺激管cpm均值/生理盐水对照管cpm均值 20210311
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