多肽的合成过程

章鱼泽 2024-05-15 20:34:11

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具体合成由下列几个循环组成：分析hplc使用柱子和泵系统，可以经受传递高压，这样可以用极细的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。hplc分两类：离子交换和反相。离子交换hplc依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。柱子在一定ph范围带有特定电荷衍变成一种离子体，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸组成表现出相反电荷。分离是一种电荷相互作用，通过可变ph，离子强度，或两者洗脱出多肽，通常，先用低离子强度的溶液，以后逐渐加强或一步一步加强，直到多肽火柱中洗脱出。离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。如sulfoethylaspartimide通过酸性ph中带正电来分离。反相hplc条件与正常层析正相反。多肽通过疏水作用连到柱上，用降低离子强度洗脱，如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成，这种链长度为g4-g8碳原子。由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的，高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。然而，总体实践中，这两类柱互变无多少显著差别，别类载体由碳水化合物构成，比如苯基。典型的操作常由两绶冲剂组成，0.1%tfa-h2o和80%acetonitrile 0.1%tfa-h2o稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m).如果用径向填柱，那么大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m)
大量各种缓冲剂含许多不同试剂，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸，稀he formic酸(5-6%,ph2-4),10-100mm nh4hco3,醋酸钠/氨，tfa/tea，磷酸钠或钾，异戊酚。这样许多不同组合可形成缓冲剂，但要注意一点：硅反相柱料不能长时间暴露于高ph，甚至微碱ph，因为这样会破坏柱子。不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%，而肽含量相关带电基团（如arg,lys）的抗离子量和肽亲水性决定。这是合成肽的本身特性。 20210311

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