traf基因和tak基因的**方法

潮拍小纯 2024-06-04 14:45:01
最佳回答
1首先,在根据genbank中已提交的鱼类traf6 和taki cdna序列的保守区设计兼并引物(traf6-f/traf6 r; taki- f/tak1-r)。2然后,扩增traf6和taki基因的核心片段。pcr产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后,与pmd18-t (takara, japan)载体连接,转人trans5a感受态细胞中,筛选阳性**进行测序。3然后,通过blast 比对分析后获得traf6和taki基因的核心片段,根据得到的核心片段设计race特异性引物(表1),利用巢式pcr扩增traf6和taki基因的5'和3'末端。 4然后,在电泳检测目的片段后,连接到载体,转化trans5a感受态细胞,筛选阳性**送测序。blast分析测序结果,seqman软件拼接得到的序列,最终获得半滑舌鳎traf6和taki基因全序列。5然后,进行序列比对和系统进化分析,利用editseq软件预测traf6和taki基因的开放阅读框(orf)及可能编码的氨基酸序列。6最后,预测和分析蛋白结构城,在ncbi数据库中搜寻其他物种的traf6和taki的氨基酸序列,利用megas.o软件,以nei**or jining法构建系统进化树。end 20210311
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